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直击,小鼠饲养细胞制备
发布时间:2019-10-28   点击次数:43次

生物科研这件事真的是微妙微翘,有太多种变化,太多种可能发生。比如说在细胞融合后选择性培养的过程中,就会有大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡,此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活,通常必须加入其它活细胞使之繁殖。而这种被加入的活细胞称之为饲养细胞(Feeder Cells)。饲养细胞促进其他细胞增殖的机制尚不明了,一般认为它们可能释放非种属特异性的生长ci激因子,为杂交瘤细胞提供必要的生长条件;也可能是为了满足新生的杂交瘤对细胞密度的依赖性。在常用的饲养细胞中有胸腺细胞、正常脾细胞和腹水巨噬细胞。其中小鼠的腹腔巨噬细胞来源及制备较为方便,且有吞噬清除死亡细胞的作用,因此使用最为方便。

 

下面就让上海晶抗生物科技有限公司带您去看看制备方法:

 

1、小鼠(一般选取经产母鼠)脱颈椎致死,注意断颈椎时尽量减少对腹腔的压迫,避免损伤腹腔内血管,以防饲养细胞内含有大量血细胞。

 

2、将小鼠浸泡于75%酒精中5min,然后手提住小鼠尾巴,上下于酒精中涮洗数次。置于超净台无菌平皿中。

 

3、用无菌剪镊从后腹剪开皮肤,沿两侧剪开皮肤,暴露腹部,注意不要损伤腹膜。用酒精棉球擦拭腹膜。

 

4、用注射器吸取6-8ml的不完全培养基注射入腹腔,注意注射时用镊子提起腹膜,避免针头刺到肠管等腹腔脏器。

 

5、用棉球轻轻an摩腹部1min,吸出注入的培养液。

 

6、800-1000 r/min离心5-10 min,弃去上清。若腹腔血管损伤,沉淀中可见有红细胞。

 

7、用5ml HAT培养基悬浮细胞,根据细胞计数结果,补加HAT培养基,使细胞浓度达2×105/ml。(一般情况下一只经产母鼠可铺2-3块96孔板。)

通常对巨噬细胞来说,96孔板每孔需要2×104个细胞,24孔板需105个细胞。每只小鼠可采~5×106个细胞,因此一只小鼠可供两块96孔板饲养细胞。

 

8、将上述细胞悬液加入96孔板,每孔0.1ml,37℃,6% CO2的培养箱培养。

 

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